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    Ø最後，與實驗結束時相比，在注射HLF穩定過表達的H1975細胞和下調H460細胞的小鼠腫瘤組織中，進一步證實了相應的高和低表達水平(補充圖4F)。

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    Ø然後，采用體內左心室接種小鼠模型檢測HLF對NSCLC遠處轉移能力的影響，將載體/NCI-H1975、HLF過表達NCI-H1975、載體/NCI-H460和HLFsh#1/NCI-H460細胞接種到小鼠左心室。

    Ø接種細胞6周後，收集小鼠的脛骨、腦、肝組織，並進行H&E染色處理。如圖所示。圖3F-I和補充圖4G，我們在與載體組相比，過HLF表達小鼠組中，包括骨、大腦和肝髒等遠處器官檢測到較少的轉移性腫瘤，以及較長的累積存活期延長。

    Ø相比之下，沉默HLF可顯著增強骨、腦和肝髒轉移瘤的形成，並縮短生存期(圖3F-I和補充圖4H)。

    Ø因此，這些結果表明，低表達HLF的NSCLC細胞具有更強的局部定植和生長能力，以及更強的遠處轉移能力。

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    Ø我們利用CCK-8、集落形成和An連接素凋亡進一步研究了HLF在NSCLC中的生物學功能，發現在正常培養條件下，HLF對NSCLC細胞的增殖和凋亡能力沒有顯著影響(補充圖5A–C)。

    Ø我們的結果顯示，上調HLF會增加培養液的PH水平，而沉默HLF會降低培養基的pH水平，但正常情況下HLF並不影響NSCLC細胞的表型和數量(補充圖5D)。

    Ø低表達HLF可能通過營養代謝途徑促進NSCLC細胞對低營養狀態的適應，因為即使在正常的含氧條件下，癌細胞也更傾向於通過厭氧途徑代謝。

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    Ø然而，上調HLF抑製NSCLC的生長，而沉默HLF可促進NSCLC細胞的錨定和懸浮生長能力(圖4A和B)，表明沉默HLF增強了NSCLC細胞在懸浮條件下的生存能力，即anoikis耐藥。這是各種癌症中與遠處轉移有關的轉移性癌細胞的主要特征。

    Ø事實上，晝夜節律基因的失調導致了NSCLC的代謝失調，HLF廣泛參與了多種物質代謝過程，包括脂質和氧化代謝。

    Ø在低血清(1%)和低葡萄糖(1g/L)培養液組成的低營養條件下，HLF過表達抑製了

    NSCLC細胞的增殖，但增加了凋亡潛能，反之亦然（圖4C-E）。

    ØHLF參與了癌細胞生長培養基的營養代謝，這是HLF抑製NSCLC細胞生長的前提條件。

    Ø在低營養條件下觀察NSCLC細胞HLF對葡萄糖、脂肪酸和蛋白質的影響。如補充圖6A，HLF表達的改變並不影響總蛋白含量。然而，HLF的上調降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了遊離脂肪酸的水平(圖4F–I)。

    Ø矛盾的是，上調HLF增加了細胞內ATP的總產生和LDH的活性(補充圖6B和C）。這些發現表明，在低營養條件下，過表達HLF的癌細胞更容易發生有氧代謝而不是厭氧代謝，這進一步支持了上調HLF降低乳酸脫氫酶(LDH)的活性，厭氧糖酵解限速酶，一些厭氧糖酵解和乳酸發酵相關基因，但增強了多個三羧酸循環相關基因(。

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