第359章(2/3)

    

    （7）放射自顯影顯示特定的DNA片段

    

    （8）分析結果

    

    4、隨機擴增多態性（RAPD）產生的原理是什麽？與普通PCR標記反應相比，產生RAPD的PCR反應體係有什麽特點？

    

    原理：用任意寡聚脫氧核苷酸單鏈的片段（通常長度為8～10bp）作為引物（也稱隨機引物，通過PCR擴增染色體組中的DNA以獲得長度不同的DNA片段，然後用凝膠電泳分離擴增片段，經染色來顯示擴增片段的多態性（長度差別）。

    

    擴增片段多態性反映了基因組相應區域的DNA多態性

    

    特點：（1）引物：單個，長度8～10bp

    

    （2）反應條件：經典的PCR複性溫度較高，一般為55～60℃，而RAPD的複性溫度僅為36℃左右

    

    （3）擴增產物：RAPD產物為隨機擴增。由於采用較短的隨機單引物和低退火溫度，一方麵保證了核苷酸引物與模板的穩定配對，另一方麵又允許適當的錯配，從而擴大引物在基因組DNA中配對的範圍，提高了基因組DNA分析的效率

    

    5、何為擴增片段長度多態性（AFLP）？AFLP反應中產生的選擇性限製片段擴增的原理是什麽？

    

    AFLP標記：是一種將限製性內切核酸酶酶切DNA和PCR技術結合，產生不同長度片段來檢測DNA多態性的分子標記技術

    

    原理：

    

    AFLP分析中為什麽要進行連續2次PCR擴增？

    

    通過兩步擴增反應使產生的擴增結果更清楚、重複性更好

    

    SSR標記的基本原理及建立SSR標記的一般程序。

    

    基本原理：由於基因組中某一特定微衛星的側翼序列通常都是保守性較強的單一序列，因而可以將微衛星側翼的DNA片段克隆、測序，然後根據微衛星的側翼兩端互補序列人工合成引物，通過PCR反應擴增微衛星片段。由於核心序列串聯重複數目不同，因而能夠用PCR擴增處不同長度的產物，將擴增產物進行電泳，不同個體的擴增產物在長度上的變化就產生長度的多態性，這又被稱為簡單序列重複長度多態性（SSLP）

    

    程序：（1）建立基因組DNA文庫

    

    根據得到的SSR類型設計並合成寡聚核苷酸探針，通過菌落雜交篩選所需重組克隆

    

    對陽性克隆DNA插入序列測序

    

    根據SSR兩側序列設計並合成引物

    

    以待研究的植物DNA為模板，用合成的引物進行PCR擴增反應

    

    高濃度瓊脂糖凝膠、非變性或變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測其多態性

    

    如何將一個RAPD或SSR分析產生的片段轉化成SCAR（序列特異擴增區域）標記？

    

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