第359章(1/3)

    出純合基因型與雜合基因型，提供完整的遺傳信息。

    

    DNA分子標記可分為哪幾類？

    

    （1）基於DNA-DNA（分子）雜交的分子標記

    

    （2）基於PCR技術的分子標記

    

    （3）基於PCR和限製性酶切相結合的分子標記

    

    （4）基於DNA芯片雜交技術的分子標記

    

    （5）針對特定結構域的分子標記

    

    （6）高通量分子標記

    

    3、試述限製性長度多態性（RFLP）標記產生的原理、特點和發展RFLP標記的基本步驟。

    

    原理：（1）利用特定的限製性內切核酸酶消化不同生物個體的基因組DNA，所產生的DNA數目和各個片段的長度反映了DNA分子上不同酶切位點的分布情況

    

    （2）瓊脂糖凝膠電泳將這些片段按大順序分離開來，然後將它們按原來的順序和位置轉移至易於操作的尼龍膜和硝酸纖維膜。

    

    （3）用放射性核素（如32P）或非放射性物質（如生物素、地高辛等）標記的DNA作為探針，與膜上的DNA進行雜交

    

    （4）經放射自顯影或酶學檢測，可顯示出不同材料對該探針的限製性酶切片段多態性情況

    

    特點：基本特點：（1）所檢測到的等位基因具有共顯性特點

    

    （2）RFLP標記位點數量不受限製，通常可檢測到的基因座位數為1～4個

    

    （3）RFLP探針主要有三種來源，即cDNA克隆、植物基因組克隆（RG克隆）和PCR克隆

    

    RFLP的優點：（1）共顯性標記，可鑒別雜合、純合基因型

    

    不需要檢測對象的序列信息

    

    不足：（1）RFLP分析的探針，必須是單拷貝或寡拷貝的，否則不能顯示清晰可辨的帶型

    

    （2）檢測所需樣本DNA量大（5～15μg）

    

    （3）實驗操作比較繁瑣，檢測少數幾個探針時成本較高

    

    （4）檢測中如要利用放射性核素（通常為32P），易造成環境汙染，檢測周期長

    

    （5）用非放射性標記係統（如Biotin係統、Dig係統及ECL係統）雜交信號相對較弱，靈敏度較低，相對價格較高

    

    基本步驟：（1）DNA的提取

    

    （2）限製性內切核酸酶酶切DNA

    

    （3）凝膠電泳分開DNA片段

    

    （4）把DNA片段轉移到濾膜上

    

    （5）利用放射性（或化學熒光等非放射性）標記的探針

    

    （6）Southern雜交

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